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24孔板細胞培養小室有哪些常見問題
24孔板Transwell實驗的門道,但實際操作中總會遇到些小狀況。
一、細胞接種與生長問題
細胞生長不均或局部死亡?
現象?:換液后部分孔細胞死亡,形成"半圓分界線"。
原因?:培養箱架子不水平導致液體分布不均;培養基溫度過低(如直接從4℃冰箱取出)造成冷休克。
解決?:確保培養箱水平;將培養基提前在37℃培養箱平衡15-30分鐘。
細胞分布不均
現象?:接種后細胞聚集在孔邊緣,細胞稀疏。
原因?:加液方式不當導致液體表面張力效應; 培養基體積不足形成彎液面。
解決?:使用多道移液器均勻加液;確保每孔加液量充足(通常500-650μL)。
二、Transwell小室操作問題
氣泡產生?
現象?:小室放入下室時產生氣泡,影響趨化梯度。
解決?:放置后若見氣泡,用鑷子輕提小室去除,再放回。
基質膠鋪板問題?
現象?:鋪膠后膠體不均勻或凝固不良。
解決?:Matrigel基質膠用無血清培養基按1:8比例稀釋,取60μL均勻鋪于上室,37℃孵育1-4小時。
三、污染與蒸發問題
現象?:培養物污染或液體蒸發。
原因?:培養板蓋子較松,利于氣體交換但增加污染和蒸發風險。
解決?:保持培養箱內清潔,放置無菌水槽維持濕度100%。
四、其他常見問題
細胞狀態不佳?:接種前細胞應處于對數生長期,活力良好。
培養時間不當?:根據細胞類型優化時間。
換液操作不當?:在通風櫥內換液時,關閉風機或逐孔操作,避免氣流導致培養基快速蒸發。
注:供科研使用,以上資料供參考,不作為實驗依據,具體請咨詢技術老師是或品牌商。
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